МУК 4.2.1018-01 Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды (с Изменением N 1). Вода питьевая мук

МУК 4.2.1018-01 Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды (с Изменением N 1), МУК (Методические указания по методам контроля) от 09 февраля 2001 года №4.2.1018-01

МУК 4.2.1018-01

4.2. Методы контроля.Биологические и микробиологические факторы

САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ

Дата введения 2001-07-01

1. РАЗРАБОТАНЫ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н.Сысина РАМН (Недачин А.Е., Доскина Т.В., Дмитриева Р.А., Тишкова Н.Ю., Сидоренко С.Г.), Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана Минздрава России (Трухина Г.М., Мойсеенко Н.Н., Сарафанюк Е.В.), Аналитическим центром контроля качества воды "Роса" (Кашкарова Г.П.), Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.), Центром госсанэпиднадзора в г.Москве (Салова Н.Я., Малышева З.Г., Кожевникова Н.А.), Центром госсанэпиднадзора в Московской области (Козлова А.Т.), Московским НИИ генетики (Бовыкина Н.М.), НИИ коммунального водоснабжения и очистки воды (Русанова Н.А.), Российской медицинской академией последипломного образования (Власова И.В.), Российским государственным медицинским университетом (Пивоваров Ю.П.).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 9 февраля 2001 г.

3. С момента ввода данных методических указаний считаются утратившими силу методические указания МУК 4.2.671-97 "Методы санитарно-микробиологического анализа питьевой воды" и Информационно-методическое письмо Департамента государственного санитарно-эпидемиологического надзора Министерства здравоохранения Российской Федерации N 1100/1670-98-111 "О дополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой воды по микробиологическим и паразитологическим показателям".

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 декабря 2010 года

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методы санитарно-микробиологического контроля качества питьевой воды в отношении ее эпидемической безопасности по показателям СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества".

1.2. Методические указания предназначены для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, осуществляющих производственный контроль, а также органов санитарно-эпидемиологической службы, обеспечивающих государственный и ведомственный санитарно-эпидемиологический надзор за качеством питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения.

2. Нормативные ссылки

2.1. Санитарные правила и нормы. "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". СанПиН 2.1.4.559-96.

2.2. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами". СП 1.2.731-99.

2.3. ГОСТ 18963-73. Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа.

3. Отбор, хранение и транспортирование проб

3.1. Общие требования к отбору проб

3.1.1. Отбор проб производит специалист после прохождения инструктажа по технике выполнения отбора проб для микробиологического анализа.

3.1.2. Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов.

3.1.3. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися пробками (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Многоразовая посуда, в т.ч. пробки, должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.

3.1.4. При отборе проб в одной и той же точке для различных целей первыми отбирают пробы для бактериологических исследований. Если отбирают воду после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, вносят до стерилизации натрий серноватисто-кислый в виде кристаллов из расчета 10 мг на 500 мл воды.

3.1.5. Пробу отбирают в стерильные емкости. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

3.1.6. При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 мин при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок. Если через пробоотборный кран происходит постоянный излив воды, отбор проб производят без предварительного обжига, не изменяя напора воды и существующей конструкции (при наличии силиконовых или резиновых шлангов).При заполнении емкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды, чтобы пробка не смачивалась при транспортировании.После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком.

3.1.7. Отобранную пробу маркируют и сопровождают документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора, фамилии специалиста, отбиравшего пробу, и другой информации.

3.2. Хранение и транспортирование проб

3.2.1. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре (4-10) °С. В холодный период года контейнеры должны быть снабжены термоизолирующими прокладками, обеспечивающими предохранение проб от промерзания. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 ч.Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2 ч после забора.Если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения, анализ пробы проводить не следует.Пробы питьевой воды должны доставляться в отдельных продезинфицированных контейнерах.

4. Оборудование, расходные материалы, реактивы, питательные среды

4.1. Оборудование

4.2. Расходные материалы

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.3. Химические реактивы

Все химические реактивы должны соответствовать квалификации не ниже ч. д. а.

Примечание._______________* Вещества обладают канцерогенным и мутагенным действием, работа с ними требует соблюдения мер предосторожности.

4.4. Питательные среды

- СИБ-лактоза- СИБ-оксидазаДопускаются к использованию коммерческие питательные среды, диагностические препараты и системы идентификации производства зарубежных фирм, предназначенные для целей описываемых методов. Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ISO 9000 или EN 29 000.При использовании следует руководствоваться рекомендациями фирмы-производителя.Все обезвоженные коммерческие питательные среды и препараты отечественного производства должны иметь сертификат соответствия.

4.5. Тест-культуры микроорганизмов

4.5.1. Контрольный колифаг МS2, штамм ВКПМ-3254 Е. coli К12 получают в ГНИИ Генетика - Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ - Россия, 113545, г.Москва, 1-ый Дорожный проезд, д.1).

4.5.2. Штамм Е. coli М17-02 и один из штаммов: Pseudomonas aeruginosa или Pseudomonas fluorescens получают в Государственном Национальном Органе контроля медицинских и биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича Минздрава России (Россия, 121002, г.Москва, ул.Сивцев-Вражек, д.41).Примечание.В производственных лабораториях, расположенных на территории водопроводных станций, следует использовать штамм Pseudomonas fluorescens.

5. Приготовление питательных сред и реактивов

5.1. Общие положения

Предпочтительно использование стандартизованных сухих питательных сред промышленного производства.При использовании промышленных сухих питательных сред их приготавливают в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке.В этом случае следует соблюдать способ применения и срок хранения питательных сред, указанные на упаковках.Сухие питательные среды хранят в сухих помещениях, в темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по ГОСТу 6709-72.Питательные среды готовят в посуде из инертного материала.Учитывая возможное изменение рН питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный контроль рН проводят в готовой среде при температуре 25 °С с использованием индикаторной бумаги.После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре. При необходимости розлива в чашки Петри среды охлаждают до температуры (50 - 60) °С.Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

5.2. Питательный бульон

5.2.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.2.2. Питательный бульон (десятикратный) для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной на этикетке.

5.3. Питательный агар

5.3.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.3.2. Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от прописи.

5.3.3. Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

5.3.4. Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. Довести рН до 7,0-7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин.

5.3.5. Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45-49) °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

5.4. Фуксин-сульфитная среда Эндо

5.4.1. Основная модификацияГотовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2-3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

5.4.2. Повышение дифференцирующих свойств средыДля повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (60-70) °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5%-ного спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина - не более 1 мес.

5.4.3. Модификация среды с добавлением розоловой кислотыВ случае роста микрофлоры, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5%-го спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты - не более 1 месяца.Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.(Измененная редакция, Изм. N 1).

5.5. Лактозо-пептонная среда

10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112±2) °С 12 мин.Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

5.6. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа

5.6.1. Полужидкая среда с лактозой из сухого препаратаГотовят по способу, указанному на этикетке.Срок хранения - не более 2 недель при комнатной температуре.Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды "карманы" - потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

5.6.2. Полужидкая среда с лактозойГотовят при отсутствии сухого препарата.В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, (4-5) г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают рН 7,2-7,4, добавляют 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120±2) °С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на высоту (3-5) см и стерилизуют при (112±2) °С 12 мин. Срок хранения - не более 2 недель при комнатной температуре.Правильно приготовленная среда зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет бутылочного стекла). При образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

5.6.3. Лактозо-пептонная средаГотовят по п.5.5 с добавлением 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего на 1 л и разливают по (3-5) мл в пробирки с поплавком.

5.6.4. СИБ-лактозаГотовят по прописи завода-изготовителя.

5.7. Реактивы для оксидазного теста

5.7.1. Вариант 11%-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят перед употреблением.

5.7.2. Вариант 2Реактив N 1. 1%-ный спиртовой раствор -нафтола.Реактив N 2. 1%-ный водный раствор фенилендиаминового соединения.Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: 1 - до одного месяца, 2 - до одной недели. Перед употреблением к трем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens) и отрицательную оксидазную реакцию (E. coli).

5.8. Железо-сульфитный агар

В 1000 мл стерильного расплавленного питательного агара (по п.5.4) добавляют 10 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при (112±2) °С 12 мин (основная среда).20%-ный раствор сульфита натрия () и 8%-ный раствор железа серно-кислого закисного () или железа хлористого () готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде. Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением анализа в 100 мл расплавленной основной среды вносят 5 мл 20%-ного раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 мл 8%-ного раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком (12-15) см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

5.9. Реактивы для окраски препаратов по Граму

5.9.1. Карболовый раствор генциана фиолетового готовят следующим образом: 1 г генциана фиолетового, 10 мл ректификованного этилового спирта, 5 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

5.9.2. Раствор Люголя готовят следующим образом: 1 г йода, 2 г йодистого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Хранить во флаконе из темного стекла.

5.9.3. Фуксин Циля готовят следующим образом: 1 г основного фуксина, 10 мл спирта этилового ректификованного, 54 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

6. Подготовка к анализу

6.1. Подготовка посуды и материалов

Лабораторную посуду моют, ополаскивают сначала водопроводной, затем дистиллированной водой и высушивают.Пробирки, колбы, бутылки, флаконы закрывают силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и колпачками (силиконовые, металлические, из фольги или плотной бумаги).Пипетки со вставленными тампонами из ваты укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу.Чашки Петри укладывают в металлические пеналы или заворачивают в бумагу. Бумага, используемая для обертывания лабораторной посуды, не должна разрушаться при стерилизации.Подготовленную посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 160 °С в течение 2 ч или 180 °С 1 ч, считая с момента достижения указанной температуры. Стерильную посуду вынимают из стерилизационного шкафа после его охлаждения ниже 60 °С. Срок хранения стерильной посуды - не более 10 дней.Материалы и лабораторную посуду, разрушающиеся при температуре (160-180) °С (резина и т.п.), следует стерилизовать в паровом стерилизаторе при температуре (121±2) °С 20 мин.Новые резиновые пробки кипятят в 2%-ном растворе натрия двууглекислого 30 мин и 5 раз промывают водопроводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки кипятят в дистиллированной воде 30 мин, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использованные ранее, обеззараживают, кипятят 30 мин в водопроводной воде с нейтральным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монтируют и стерилизуют.После выполнения анализа все использованные чашки, пробирки и пипетки обеззараживают в автоклаве при (126±2) °С в течение 60 мин, в исключительных случаях допускается обеззараживание кипячением в 2%-ном растворе пищевой соды или 0,5%-ном моющего средства в течение 60 мин с момента закипания (в закрытой емкости с полным погружением в раствор).

6.2. Подготовка проб воды

Перед посевом пробу тщательно перемешивают и фламбируют горящим тампоном край емкости. Используемые пробирки и чашки маркируют.Перед каждым отбором новой порции воды для анализа пробу перемешивают стерильной пипеткой.

7. Методика работы при использовании фильтрующих материалов

7.1. Подготовка фильтрующих материалов

Фильтрующие материалы должны быть подготовлены к анализу в соответствии с указаниями изготовителя.

7.2. Подготовка фильтровального аппарата

Воронку и столик фильтровального аппарата обтирают марлевым (ватным) тампоном, смоченным спиртом ректификованным, и фламбируют. После охлаждения на столик фильтровального аппарата кладут фламбированным пинцетом стерильный фильтрующий материал, прижимают его воронкой.7, 7.1, 7.2 (Измененная редакция, Изм. N 1).

7.3. Фильтрование воды

В воронку прибора для фильтрования наливают отмеренный объем воды, затем создают вакуум.При посеве нескольких объемов одной пробы следует фильтровать через один фильтровальный аппарат без обеззараживания сначала меньшие, а затем большие объемы воды, меняя каждый раз фильтры. Перед фильтрованием каждой новой пробы прибор обеззараживают.Следует начинать с фильтрования проб обеззараженной воды или тех проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы.При фильтровании 1 мл исследуемой воды следует в воронку налить предварительно не менее 10 мл стерильной воды, а затем внести анализируемую воду.После окончания фильтрования и осушения фильтра отключают вакуум, воронку снимают, фильтр осторожно поднимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на питательную среду, разлитую в чашки Петри, избегая пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, номера пробы и даты посева. На одну чашку можно поместить 3-4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.

8. Проведение анализа

8.1. Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре

8.1.1. Определение понятия показателяМетод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

8.1.2. Выполнение анализаИз каждой пробы делают посев не менее двух объемов по 1 мл.После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки. После внесения воды в каждую чашку вливают (8-12) мл (на чашку диаметром 90-100 мм) расплавленного и остуженного до (45-49) °С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержится. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.Расплавленный агар на период проведения анализа помещают в водяную баню или термостат, поддерживающие температуру (45-49) °С.После застывания агара чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч.

8.1.3. Учет результатовПодсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза. Учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.Количество колоний на обеих чашках суммируют и делят на два. Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы воды.Если на одной из 2 чашек подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. Если на двух чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают "число КОЕ/мл - ориентировочно".Если подсчет колоний на чашках невозможен, то в протоколе отмечают "сплошной рост".

8.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод)

8.2.1. Определение понятия показателяОбщие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) ч.Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 ч.

8.2.2. Принцип методаМетод основан на фильтрации установленного объема воды через фильтрующие материалы, выращивании посевов на дифференциальной питательной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим свойствам.(Измененная редакция, Изм. N 1).

8.2.3. Выполнение анализа

8.2.3.1. Порядок исследованияПри исследовании питьевой воды анализируют 3 объема по 100 мл.При получении стабильных отрицательных результатов допустима фильтрация 300 мл воды через один фильтр.При фильтрации воды неизвестного качества целесообразно увеличение количества фильтруемых объемов для получения изолированных колоний на фильтре (например, 10, 40, 100, 150 мл воды).Отмеренный объем воды фильтруют с соблюдением требований, изложенных в п.7.Фильтры помещают на среду Эндо, приготовленную по п.5.4. Чашки с фильтрами ставят в термостат дном вверх и инкубируют посевы при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч.Если на фильтрах нет роста или выросли колонии пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, расплывчатые, выдают отрицательный ответ: отсутствие ОКБ и ТКБ в 100 мл исследуемой воды. Анализ заканчивают через 24 ч.Если на фильтрах обнаружен рост изолированных типичных лактозоположительных колоний: темно-красных, красных с металлическим блеском или без него или других подобного типа колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра, подсчитывают число колоний каждого типа отдельно и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.Для подтверждения наличия ОКБ исследуют:

- все колонии, если на фильтрах выросло менее 5 колоний;- не менее 3 - 4 колоний каждого типа.Для подтверждения наличия ТКБ исследуют все типичные колонии, но не более 10.Каждую выбранную изолированную колонию исследуют на:

docs.cntd.ru

Микробиологические исследования воды

Микробиологический анализ воды

Питьевая вода:

Несоответствие воды микробиологическим нормам, так же, как и химическим, делает ее непригодной для питья. Если Ваш источник водоснабжения не защищен от прямого воздействия окружающей среды или коммунальные системы устарели или давно не чистились, то сделать микробиологический анализ воды просто необходимо. От этого зависит Ваше здоровье и безопасность! Особенно это важно для тех, кто пользуется колодцем. Колодезная вода – грунтовая, она на прямую контактирует с почвами, а значит, грозит «напоить» Вас и нитратами, и тяжелыми металлами, и аммиаком, и, конечно, вредными органическими веществами, которые попадают в почву в результате деятельности сельскохозяйственных ферм или угодий.

В таблице 1 представлены микробиологические показатели действующего норматива СанПиН 2.1.4.1074-01 для питьевой воды:

Таблица 1. Микробиологические нормативы для питьевой воды

Стандартный микробиологический анализ (вода питьевая):

Стандартный микробиологический анализ питьевой воды в МГУ включает определение трех показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных и термотолерантных колиформных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ (вода питьевая):

Расширенный микробиологический анализ воды включает анализ пяти показателей: общего микробного числа, количества общих колиформных бактерий, количества термотолерантных колиформных бактерий, титр колифагов и содержание спор сульфитредуцирующих бактерий.

Микробиологический анализ поверхностных водоемов (пруды, реки, бассейны)

Часто на наших участках или поблизости имеются водоемы, где мы и наши дети с удовольствием любим провести время. Конечно, вода в данных водоемах не является питьевой, но ее безопасность для человека также, как и питьевая, регламентируется. В таблице 2 представлены микробиологические показатели действующего норматива по гигиеническим требованиям к охране поверхностных вод (СанПиН 2.1.5.980-00)

Таблица 2. Микробиологические нормативы для рекреационного водопользования, а также в черте населенных мест

Стандарнтный микробиологический анализ (поверхностные водоемы):

Микробиологический анализ воды, предназначенной не для питья, включает определение количества двух показателей: общих колиформных и колиформных термотолерантных бактерий.

Расширенный микробиологический анализ (поверхностные водоемы):

Помимо двух основных показателей мы предлагаем провести дополнительный анализ на содержание: колифагов, условно-патогенных дрожжей и микромицетов (частых спутников опортунистических заболеваний) и индекса самоотчищения водоема.

Определение бактерий рода Salmonella и рода Enterococcus

При значительном превышении нормативов  СанПиН 2.1.5.980-00, а также возможном фекальном загрязнении водоема, мы предлагаем провести анализ на наличие возбудителей кишечных инфекций (род Salmonellaи Enterococcus)

Глоссарий:

Общая микробная численность (ОМЧ):

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 °С в течение 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза. Данный индикатор выявляет потенциальных бактерий, способных причинить вред здоровью человека.

Общие колиформные бактерии (ОКБ):

Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидазоотрицательные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (37+1) °С в течение (24-48) ч. Многие представители данной группы являются микроорганизмами нормальной микрофлоры желудка, поэтому превышение данной группы микроорганизмов может говорить о возможно антропогенном (в том числе и фекальном) загрязнении воды.

Термотолерантные колиформные бактрии (ТКБ):

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) входят в число общих колиформных бактерий, обладают всеми их признаками и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре (44±0,5) °С в течение 24 часов. Также, как и ОКБ являются индикаторной группой, однако более устойчивые в окружающей среде: вот почему обнаружение данной группы микроорганизмов в воде может говорить об однозначном загрязнений ее продуктами жизнедеятельности человека.

Колифаги

Колифаги, определяемые стандартным методом (МУК 4.2.1018-01), являются вирусами кишечной палочки (Escherichia coli) и рассматриваются эпидемиологами как дополнительный, а порой и более чувствительный, метод в определении загрязнения воды микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы, и в частности колифаги, более устойчивы к окружающей среде, чем их бактерии-хозяева. В связи с этим, наличие колифагов может служить достоверной меткой о более давнем фекальном загрязнении источника воды. Показана прямая корреляция между содержанием колифагов в воде и опасных для человека энтеровирусов, поэтому наличие колифагов в воде может говорить о вирусном заражении источника. Действующий нормативный документ (СанПиН 2.1.4.1074-01) подразумевает отсутствие колифагов в 100 мл воды.

Споры сульфитредуцирующие клостридии

 Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, являющиеся дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения водоема. В отличие от относительно неустойчивых колиформных и термотолерантных колиформных бактерий, споры клостридий могут сохраняться в водоемах долгое время. Клостридии встречаются в кишечнике человека и домашних животных, однако, при попадании с водой в большом количестве могут вызвать пищевые отравления. К сульфитредуцирующим клостридиям относятся в том числе и опасные для человека клостридии (Clostridiumbotulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani), вызывающие тяжелейшие заболевания. Согласно действующему нормативу (СанПиН 2.1.4.1074-01) споры клостридий должны отсутствовать в 20 мл воды.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов, способных сапротрофно расти при 37 °С. В нее входят такие представители, как Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые являются частым фактором оппортунистических заболеваний человека, вызывая кандидозы (грибковые заболевания кожи), молочницы и проч. Другие организмы микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) могут являться активными сенсебилизаторами аллергических реакций, а иногда и самими аллергенами. В РФ не нормируется вода по плесеням и дрожжевым организмам в воде.

Определение индекса самоочищения (из МУК 4.2.1884-04)

Общее число микроорганизмов не нормируется в воде водоемов в зонах рекреаций, поскольку уровень этой группы микроорганизмов в большей мере зависит от природных особенностей каждого объекта, времени года и т.п.

Однако при выборе нового источника водоснабжения или места рекреации в воде водоемов дополнительно следует определять общую микробную численность, вырастающую

• при температуре 37 °С в течение 24 часов
• при температуре 22 °С в течение 72 часов

Полагается, что

• ОМЧ при 37 °С представлена большей частью алохтонной микрофлорой (внесенную в водоем в результате антропогенного загрязнения, в т.ч. фекального)
• ОМЧ при 20 - 22 °С представлена, помимо алохтонной, аборигенной микрофлорой (естественной, свойственной для данного водоема)

Соотношение численности этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процесса самоочищения. При завершении процесса самоочищения коэффициент ОМЧ 22 °С/ ОМЧ 37 °С. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп близки.

Показатель позволяет получить дополнительную информацию о санитарном состоянии водоемов, источниках загрязнения, процессах самоочищения.

www.msulab.ru

МУК 4.2.964-00 Санитарно-паразитологическое исследование воды хозяйственного и питьевого использования, МУК (Методические указания по методам контроля) от 22 марта 2000 года №4.2.964-00

МУК 4.2.964-00

4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы

САНИТАРНО-ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ ХОЗЯЙСТВЕННОГО И ПИТЬЕВОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Дата введения 2000-06-01

1. ПОДГОТОВЛЕНЫ коллективом авторов: Г.И.Новосильцев (к.м.н.), Н.А.Романенко (д.м.н., академик РАЕН), В.А.Рябченко (к.б.н.), Г.С.Горяинова, Т.А.Семенова (к.б.н.), М.Е.Батаева (к.м.н.), Ю.А.Рахманин (д.м.н., академик РАМН), Р.Э.Михайлова (д.м.н.) - ИМПиТМ им. Е.И.Марциновского Минздрава России, НИИКВОВ АКХ им. К.Д.Памфилова, НИИЭЧиГОС им. А.Н.Сысина РАМН. Использованы материалы, разработанные Н.А.Русановой (к.м.н), Г.Л.Медришем (к.т.н.) - НИИКВОВ АКХ им. К.Д.Памфилова.

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 22 марта 2000 г.

3. С введением настоящих методических указаний утрачивают силу МУК 4.2.668-97 "Санитарно-паразитологическое исследование воды" и раздел "Контроль качества питьевой воды по паразитологическому показателю (содержание цист лямблий)", пункты 4, 5, 6 Информационно-методического письма "О дополнительных мерах по осуществлению контроля качества питьевой воды по микробиологическим и паразитологическим показателям" от 24 июля 1998 г. N 1100/1670-98-11.

1. Назначение и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают метод лабораторного исследования качества воды хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования по паразитологическим показателям безопасности для здоровья человека, проводимого в порядке государственного санитарно-эпидемиологического надзора.

1.2. Методические указания предназначены для применения в лабораториях учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор, а также ведомственный лабораторный контроль качества окружающей среды на соответствие:- СанПиН 2.1.4.559-96 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества";- СанПиН 2.1.2.568-96 "Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды плавательных бассейнов";- СанПиН 3.2.563-96 "Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации";- действующим санитарным правилам по охране поверхностных вод от загрязнения.

2. Методика санитарно-паразитологического исследования воды хозяйственного и питьевого использования

Методика предназначена для обнаружения в воде цист патогенных простейших кишечника (лямблий, амебы дизентерийной, балантидия) и яиц гельминтов, представляющих непосредственную угрозу для здоровья человека при их заглатывании, при осуществлении контроля качества воды по паразитологическим показателям в источниках хозяйственно-питьевого водоснабжения (поверхностных водоемах, ручьях, каптажах, колодцах, артезианских скважинах), в распределительной сети систем централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения, а также в водоемах рекреационного назначения*.________________* Настоящая методика не предназначена для индикации в воде ооцист криптоспоридий, т.к. для их определения требуются более сложная подготовка диагностического материала и использование дорогостоящих специальных тест-систем, не выпускаемых в настоящее время отечественными производителями.

Цисты патогенных простейших кишечника и яйца гельминтов обнаруживаются при микроскопическом исследовании осадка, получаемого после центрифугирования не менее 4-кратно разведенного раствора флотанта с плотностью 1,26, в который искомые паразитарные агенты попадают из осадка, смываемого с мембранных фильтров после фильтрации через них исследуемой воды. Осаждение цист простейших и яиц гельминтов происходит за счет резкого снижения плотности флотанта, которая после разведения достигает 1,03 и менее, что ниже плотности паразитарных агентов. Плотность их приводится в разделе 7.

Метод обладает чувствительностью с пределом обнаружения, равным единичным цистам лямблий на 1 л. Эффективность выделения цист лямблий данным методом зависит от исходной концентрации паразитарных патогенов в пробе, объема пробы, мутности, обилия фитопланктона и квалификации исполнителя.

3. Оборудование и материалы

3.1.1. Устройство для вакуумной фильтрации через мембранные фильтры: стационарное устройство, используемое для бактериологических и химических исследований в лабораториях водоочистных станций и центров госсанэпиднадзора: фильтровальный аппарат АФ или "Прибор вакуумного фильтрования" ПВФ-142/ЭМ. При отсутствии указанных стационарных установок может быть использован аппарат Гольдмана, состоящий из воронки Гольдмана, колбы для фильтрования под вакуумом номинальной вместимостью 2000-5000 мл (ГОСТ 6514-63), водоструйного насоса (ГОСТ 10696-75) или насоса Комовского, а в полевых условиях - ручного велосипедного насоса или других установок, прошедших гигиеническую оценку и имеющих гигиеническое заключение.

3.1.2. Мембранные фильтры с порами размером 3-5 мк и диаметром мембранного диска, соответствующим размерам фильтровальной ячейки фильтрующего устройства, - от 35±2 мм и более. В качестве мембранных фильтров могут быть применены фильтрующие мембраны "Владипор" марки МФАС-СПА ТУ 6-55-221-15-18-98 (предназначены для использования в приборе ПВФ-142/ЭМ), "Миллипор", "Прагопор", "Сарториус" или другие с аналогичными свойствами, прошедшие гигиеническую оценку и имеющие гигиеническое заключение.

3.1.3. Лабораторная центрифуга типа ОПН-3, ОПН-8, ЦЛС-31М со сменным ротором или другие с аналогичными параметрами, обеспечивающие 1500-2500 об/мин (600-650 g), позволяющие центрифугировать пробы воды в центрифужных пробирках объемом 10-250 мл.

3.1.4. Холодильник электрический или газовый, поддерживающий температуру 4-6 °С.

3.1.5. Термостат электрический типа ТС-80 или аналогичный с автоматическим терморегулятором и термометром с ценой деления 0,2 °С.

3.1.6. Микроскоп биологический (типа МБИ, "Биолам" и др.), снабженный бинокулярной насадкой (АУ-12 и др.), препаратоводителем (типа СТ-12 и др.), имеющий объективы 10, 20, 40 и объектив 90-100х масляной иммерсии, а также желательно объектив 40-65х водной иммерсии, обеспечивающий увеличение от 100 до 1000 крат, имеющий объектив и укомплектованный окуляр-микрометром и объект-микрометром для калибровки первого, а также имеющий оптику фазового контраста, расширяющую возможности дифференциации цист от фитопланктона.

3.1.7. Осветитель ОИ-19 для микроскопа или другой аналогичный с мощностью лампы не менее 50 ватт.

3.1.8. Весы лабораторные для взвешивания в диапазоне 50 мг - 200 г равноплечные ручные (аптекарские) с разновесами, ВЛР-200 и др.

3.1.9. Денсиметры (ареометры) типа 1 (А1) с пределами измерения от 1,000 до 1,400 кг/м ГОСТ 1300-74.

3.1.10. Дозаторы пипеточные П1-0,1, П1-0,5, П1-1,0 мл ТУ 64-339-81 или аналогичные.

3.1.11. Пинцет анатомический.

3.1.12. Кисти мягкие из волоса белки, колонка или соболя для живописи NN 12-18.

3.1.13. Стаканы стеклянные высокие с носиком (ВН) номинальной вместимостью 50-100 мл ГОСТ 10394-63.

3.1.14. Пробирки центрифужные градуированные (ПЦГ) емкостью 10 мл ГОСТ 1770-64.

3.1.15. Стекла предметные 25 х 75 мм.

3.1.16. Стекла покровные 18 х 18, 24 х 24 мм ГОСТ 6672-59.

3.1.17. Чашки биологические (Петри) ГОСТ 25336-82.

3.1.18. Часы песочные на 3-5 мин или часы сигнальные.

3.1.19. Штативы лабораторные для пробирок ТУ 64-1-707-80.

3.1.20. Емкости для отбора проб воды из нейтрального материала, пригодные для обеззараживания принятыми методами: канистры пластмассовые емкостью 5-10-20-25 л, стеклянные бутыли, фляги молочные металлические емкостью 30-35 л, эмалированные бидоны.

3.1.21. Цилиндры измерительные с носиком 1-100, 1-250, 1-500 ГОСТ 1770-74.

3.1.22. Колба 2-50-2, 2-100-2, 1-1000 ГОСТ 1770-74.

3.1.23. Капельница для многократной дозировки по Манну ГОСТ 9876-61.

3.1.24. Широкогорлые стеклянные или пластиковые флаконы емкостью 100-500 мл с притертыми или завинчивающимися крышками.

3.1.25. Спиртовка.

docs.cntd.ru

Смотрите также

• 
  Мука из кунжута
• 
  Травяная мука производство
• 
  Смерть в муках
• 
  Мука из толокна
• 
  Блины сколько муки
• 
  Кекс кукурузной мукой
• 
  Лук мука яйцо
• 
  В муке нашли
• 
  Панировка в муке
• 
  Мука сухие дрожжи
• 
  Инструкция мука мясокостная