Лабораторная работа по биологии 7 класс строение дрожжей: Лабораторные работы «Строение плесневого гриба мукора» и «Строение дрожжей»

Лабораторная работа № 7 «Рассматривание дрожжей и мукора под микроскопом» | План-конспект занятия по биологии (5 класс) на тему:

Опубликовано 13.11.2016 — 20:15 — Добровольская Галина Александровна

Лабораторная работа № 7 «Рассматривание дрожжей и мукора под микроскопом»
 

Цель работы: познакомиться со строением плесневых грибов на примере мукора, а также со строением дрожжей.
Оборудование: культура мукора, пеницилла, дрожжей, стеклянные палочки, препаровальные иглы, пипетки, лупа, предметные и покровные стекла, микроскоп
Ход работы:
1.Рассмотрите внешнее строение гриба мукор с помощью лупы. Найдите головки со спорами, определите, где расположен мицелий
2.При помощи препаровальной иглы перенесите несколько нитей гриба со спорами на предметное стекло, капните туда каплю воды. Накройте гриб покровным стеклом. Рассмотрите мицелий и спорангии мукора. Определите, есть ли в нитях грибницы поперечные перегородки? 
 

Скачать:

Предварительный просмотр:

Лабораторная работа № 7 «Рассматривание дрожжей и мукора под микроскопом»

Цель работы: познакомиться со строением плесневых грибов на примере мукора, а также со строением дрожжей.
Оборудование: культура мукора, пеницилла, дрожжей, стеклянные палочки, препаровальные иглы, пипетки, лупа, предметные и покровные стекла, микроскоп
Ход работы:
1.Рассмотрите внешнее строение гриба мукор с помощью лупы. Найдите головки со спорами, определите, где расположен мицелий
2.При помощи препаровальной иглы перенесите несколько нитей гриба со спорами на предметное стекло, капните туда каплю воды. Накройте гриб покровным стеклом. Рассмотрите мицелий и спорангии мукора. Определите, есть ли в нитях грибницы поперечные перегородки? 

3.Зарисуйте внешний вид мукора. Запишите, какими номерами на рисунке обозначены грибница, головка и споры. 
4.Возьмите каплю жидкости с культурой дрожжей. Поместите ее на предметное стекло и накройте покровным.
5. Рассмотрите клетки дрожжей в микроскоп. Зарисуйте внешний вид одиночных и почкующихся дрожжей.
6.Сделайте вывод о сходстве и различии в строении плесневых грибов пеницилла и мукора. Сравните строение плесневых грибов с дрожжами.

Приложение

По теме: методические разработки, презентации и конспекты

Лабораторная работа «Одноклеточные и многоклеточные организмы под микроскопом» (природоведение)

лабораторная работа «Одноклеточные и многоклеточные организмы под микроскопом», с чётко поставленной целью, позволяющая не только провести исследования, но и повторить ранее изученный материал. …

«Ткани растений. лабораторная работа «Рассматривание тканей растений»»

Представлена методическая разработка урока биологии в 6 классе с использованием ЦОР. урок включает в себя лабораторную работу по рассматриванию препаратов тканей растения под микроскопом, работу с фле…

Лабораторная работа: «Выращивание белой плесени мукора»

Известно, что продукты, на которых появляется плесень либо выбрасывают, либо подвергаются обработке. Очень часто плесень появляется на хлебе. Чтобы задержать развитие плесени в хлеб добавляют пр…

Инструкция для выполнения лабораторных работ в кабинете биология с использованием микроскопа

Данная инструкция предназначена для учащихся  при выполнении в кабинете биологии лабораторных работ, связанных с использованием микроскопа…

Лабораторная работа по теме: « Приготовление препаратов и рассматривание под микроскопом пластид в клетках ».

для 5 класса по ФГОС…

биология – 6 класс Тема урока:«Ткани растений.

Лабораторная работа «Рассматривание тканей растений»».

№ п/пЭтап урока, времяСодержание Деятельность учащихсяДеятельность учителя 1Организацион-ный этап2 мин.- Подготовка учащихся к работе на уроке,- обеспечить нормальную внешнюю  обстановку для…

Конспект урока «Строение растительной клетки. Лабораторная работа «Приготовление и рассматривание препарата кожицы чешуи лука под микроскопом»

Конспект урока «Строение растительной клетки. Лабораторная работа «Приготовление  и рассматривание препарата  кожицы чешуи лука под микроскопом»…

Поделиться:

ГДЗ Биология Пасечник. Линейный курс 7 класс Лабораторные

Смотреть правильно оформленное решениe и ответ на задание Лабораторные работы по биологии 7 класс автор(ы) Пасечник. Линейный курс

Содержание

• Строение зелёных одноклеточных водорослей
• Строение спороносящего хвоща
• Строение спороносящего папоротника
• Строение хвои и шишек хвойных
• Строение плодовых тел шляпочных грибов
• Плесневый гриб мукор
• Строение дрожжей

Строение зелёных одноклеточных водорослей

1. Помещаем на предметное стекло микроскопа каплю «цветущей» воды, накрываем покровным стеклом.

2. Рассматриваем при малом увеличении одноклеточные водоросли. Находим хламидомонаду (тело грушевидной формы с заострённым передним концом) или хлореллу (тело шаровидной формы).

3. Оттягиваем часть воды из-под покровного стекла полоской фильтровальной бумаги и рассматриваем клетку водоросли при большом увеличении.

4. Находим в клетке водоросли оболочку, цитоплазму, ядро, хроматофор. Обращаем внимание на форму и окраску хроматофора. Хроматофор, в котором откладывается крахмал, имеет вид сильно вырезанной чаши. За счет того, что на нем имеется большое количество таких впячиваний, площадь распространения хлоропластов увеличивается.

5. Зарисуйте клетку и подпишите названия её частей. Правильность выполнения рисунка проверьте по рисункам учебника.

Вывод:

В ходе лабораторной работы мы ознакомились со строением зеленых одноклеточных водорослей на примере хлореллы и хламидомонады. Они имеют схожее строение, так как в них выделяют: ядро, клеточную оболочку, цитоплазму и хроматофор. Также у хламидомонады есть жгутики, с помощью которых она может передвигаться (у хлореллы они отсутствуют), и светочувствительный элемент – «глазок».

Строение спороносящего хвоща

1. С помощью лупы рассматриваем летний и весенний побеги хвоща полевого из гербария.

2. Находим спороносный колосок. В нем с наступлением весны развиваются споры, при помощи которых растение может размножаться и рассеиваться. Когда наступает момент созревания, колоски раскрываются, а споры вылетают наружу и разносятся ветром. Попадая в благоприятную почву, споры начинают прорастать, давая жизнь новому растению.

3. Зарисовываем побеги хвоща.

Вывод:

Хвощ является высшим споровым растением, к которого можно выделить отдельные органы: корень и корневище, стебель и листья, спороносный колосок, мутовки листьев. Размножается хвощ при помощи спор, которые созревают весной в спороносном колоске, располагающемся на верхушке побега.

Строение спороносящего папоротника

1. Изучаем внешнее строение папоротника. Рассматриваем форму и окраску корневища; форму, размеры и окраску вай. У побега папоротника есть корневище, которое находится в почке и служит для прикрепления растения к субстрату и поглощения из него воды и растворенных в ней питательных веществ. Оно коричневого цвета.

Вайями называют светло-зеленые или зеленые рассеченные листья у папоротника, которые растут прямо из корневища. В среднем они могут достигать до 70 см в длину.

2. Рассматриваем бурые бугорки на нижней стороне вайи в лупу. Это спорангии, которые собраны в группы. В них развиваются и зреют споры, с помощью которых папоротники могут размножаться и расселяться на разных территориях.

3. Сравниваем папоротники со мхами. И у одних, и у вторых растений имеются стебельки и листья. Растут мхи и папоротники в увлажнённой среде, ведут неподвижный образ жизни и могут расти в течение всей своей жизни неограниченно. Размножаются при помощи спор, которые развиваются и зреют в спорангиях (у папоротника) и спороносных колосках (у мха). Также оба этих растения содержат в своих клетках хлорофилл, благодаря чему происходит процесс фотосинтеза.

Отличие состоит в том, что у папоротников есть большое количество придаточных корней, которые растут от корневища, а у мхов корни вовсе отсутствуют, вместо них — ризоиды. Также у папоротников большие листья – вайи со сложным строением, тогда как у мхов листья мелкие. В стебле у папоротниковых растений есть сосудистые пучки, благодаря которым они приспособились к наземному образу жизни и что является преимуществом по сравнению со мхами. Это говорит о том, что у папоротников развиты механические и проводящие ткани. У мхов они отсутствуют.

4. Обосновываем принадлежность папоротника к высшим споровым растениям. Во-первых, у папоротника тело разделено на органы, среди которых выделяют корневище с придаточными корнями, листья или ваий, расположенные на слабо развитых стебельках. Во-вторых, потому что размножается это растение с помощью пор. В-третьих, у него хорошо развиты проводящие и механические ткани.

Вывод:

Сравнивая строение мха и папоротника, можно сделать вывод, что папоротник относится к высшим споровым растениям. Растут папоротники в увлажненных почвах и крепятся к ним корневищем с хорошо развитыми придаточными корешками. Листья у них светло-зеленого цвета и имеют сильно рассеченную форму, называются вайями. На нижней стороне вайи находятся маленькие бугорки бурого цвета – спорангии, в которых развиваются споры. Споры нужны для размножения.

Строение хвои и шишек хвойных

1. Рассматриваем форму хвои, расположение её на стебле. Измеряем длину и обращаем внимание на окраску.

2. Пользуясь представленным ниже описанием признаков хвойных деревьев, определяем, какому дереву принадлежит рассматриваемая ветка.

3. Рассматриваем форму, размеры, окраску шишек. Заполняем таблицу.

4. Отделяем одну чешуйку. Ознакомимся с расположением и внешним строением семян. Такие хвойные растения, как сосна, пихта, ель и лиственница являются голосеменными, так как их семена лежат на поверхности чешуек шишек. У шишки ели нижняя сторона чешуйки вогнутая и содержит два семени. Семенные чешуи шишки сосны на конце имеют утолщения, из-за чего внешне напоминают щиток. Сами семена крылатые и размещены в семенной чешуе парами. У лиственницы семенные чешуи округлой или яйцевидной формы, неплотно прилегают. Кроющие чешуйки практически незаметны, а семя имеет крылышко, благодаря чему легко разносится ветром. У пихты семена трапециевидной формы, чешуйки плоские.

Вывод:

Рассмотрев шишки и семена пихты, лиственницы, ели и сосны, можем сделать вывод, что все эти растения голосеменные, потому что их семена расположены на поверхности чешуек шишек. Листья таких растений видоизменены в хвою, что существенно снижает количества испаряемой влаги и не дает растению засохнуть в условиях засушливого климата. Корневая система образована главным корнем и боковым корешками. Стебель плотный, хорошо развит. Размножение голосеменных растений происходит семенами, которые формируются и развиваются в семязачатках.

Строение плодовых тел шляпочных грибов

1. Рассматриваем плодовые тела шляпочных грибов. Находим их основные части. Это ножка или пенек и шляпка. Гифы ножки плотно прилегают друг к другу, тем самым образуя нити грибницы.

2. Рассматриваем особенности строения нижней стороны шляпки. Мы можем увидеть отверстия трубочек, либо пластинки, в которых образуются споры – особые клетки, необходимые для размножения грибов.

Вывод:

Плодовое тело у шляпочных грибов служит для образования спор. Они формируются в пластинках и трубочках, которые во много раз увеличивают поверхность спорообразования. Споры необходимы грибам для размножения.

Споры имеют яйцевидную фору и составляют всего одну сотую миллиметра в длину. По цвету они различаются, что является своеобразным отличительным признаком вида грибов. К пластинчатым грибам относятся лисички, шампиньоны, сыроежки. К трубчатым – белый гриб, подосиновик, подберезовик.

Плесневый гриб мукор

1. Выращиваем на хлебе белую плесень. Для этого на слой влажного песка, насыпанного в тарелку, кладем кусок хлеба, накрываем его другой тарелкой и ставим в тёплое место. Через несколько дней на хлебе появился пушок, состоящий из тонких нитей мукора. Рассматриваем в лупу плесень в начале её развития и позднее, при образовании чёрных головок со спорами.

2. Готовим микропрепарат плесневого гриба мукора. Развивается мукора как рас растительных остатках, так и в почве, на овощах или фруктах.

3. Рассматриваем микропрепарат при малом и большом увеличении.

Найдите грибницу, спорангии и споры.

4. Зарисовываем строение гриба мукора и подписываем названия его основных частей.

Вывод:

Мицелий является основой мукора. При малом увеличении он представляет собой сплетение белых нитей, на которых расположены шарики. При большем увеличении – разветвленную клетку с большим количеством ядер. Волоски, которые растут из основного тела мукора, это спорангиеносцы в виде шариков. В них находятся споры, необходимые грибу для размножения и расселения. Сами споры мелкие, очень легкие, а потому быстро разносятся потоками воздуха. При наступлении благоприятных условий (тепло, влажность) из спор появляются новые нити плесени.

Строение дрожжей

1. Разводим в тёплой воде небольшой кусочек дрожжей. Набираем в пипетку и наносим 1 – 2 капли воды с клетками дрожжей на предметное стекло. Накрываем покровным стёклышком и рассматриваем препарат с помощью микроскопа при малом и большом увеличении. Сравниваем увиденное с рисунком 107. Находим отдельные клетки дрожжей, на их поверхности рассмотрите выросты – почки. Под микроскопом дрожжевые клетки выглядят так, как на рисунке 107.

2. Зарисовываем клетку дрожжей и подписываем названия её основных частей.

Вывод:

Дрожжи относятся к одноклеточным грибам. Их клетка шарообразной продолговатой формы, имеет клеточную оболочку и клеточную мембрану, ядро, вакуоль, цитоплазму, рибосомы и митохондрии. Также видны мембранные пузырьки. Размножение у дрожжей происходит почкованием.

Изначально на взрослой клетке образуется выпуклость, которая увеличивается и постепенно превращается в самостоятельную клетку. Чуть позже она отделяется от материнской. Почкующиеся дрожжи напоминают по внешнему виду ветвящиеся цепочки.

Глава 1

Многообразие растений

Параграф 1. Систематика растений

biology lab answer key — Google Suche

AlleBilderVideosShoppingMapsNewsBücher

Suchoptionen

Bilder

Alle anzeigen

Alle anzeigen

Biology Lab Manual Answer Key

Buch

Biology Lab Homework Help & Answers — Studypool

www. studypool.com › теги › biology-lab

Biology Lab Помощь с домашним заданием. Публикуйте вопросы о домашних заданиях и получайте ответы от проверенных репетиторов 24/7.

Biology Lab Manual Answer Key Pdf — pdfFiller

www.pdffiller.com › 362083502-chapter-14-the-hu…

Bewertung 4,0

(24)

9000 Ключ Pdf, Редактировать онлайн. Подписывайте, отправляйте по факсу и распечатывайте с ПК, iPad, планшета или мобильного телефона с помощью pdfFiller ✓ Мгновенно. Попробуй сейчас!

Answer Key Lab Диффузия и осмос — BIO 130 — Studocu

www.studocu.com › … › Экологическая биология

Это ответы лаборатории диффузии и осмоса. Довольно полезно и легко следовать. Удачи и желаю вам всего наилучшего! лабораторная диффузия и осмос клетки.

Лабораторное руководство по биологии, ключ к ответам на вопросы.pdf — Course Hero

www.coursehero. com › file › biology-laboratory-m… Техасский университет. Зарегистрируйтесь бесплатно для скачивания файлов | Имя файла: Биология …

[PDF] BIOL 1400 ИМЯ: КЛЮЧ ОТВЕТА Биология для общего образования LAB

факультет.ука.эду › benw › biol1400 › практический экзамен1-ключ

Этот экзамен состоит из пятидесяти кратных -выборные вопросы. У каждого есть только один правильный ответ. Внимательно прочитайте каждый вопрос и все возможные ответы, прежде чем …

9780785436225: Руководство по биологической лаборатории. Рассказы — 2006 — Мягкая обложка.

[PDF] Mcgraw Hill Biology Lab Answer Key [PDF] — UTSA Online

www.online.utsa.edu › mcgraw-hill-biology-lab-answer-key

27.11.2022 · Получение книг mcgraw Ключ ответа лаборатории биологии холма теперь не является типом вдохновляющего средства. Вы не могли бы в одиночку взяться за …

[PDF] Explorations In Basic Biology Lab. -биология-лаборатория-ответ-ключ. 1/1. Загружено с сайта www.online.utsa.edu 5 декабря 2022 г. гостем. Исследования в базовой биологической лаборатории …

Руководство по биологической лаборатории Ключ к ответу Обзоры и рейтинги — Amazon.in

www.amazon.in › Biology-Lab-Manual-Answer-Key

Bewertung 5,0

(1)

Amazon.in — Купить книгу «Руководство по биологии для лаборатории» онлайн по лучшим ценам в Индии на Amazon.in. Прочитать лабораторное руководство по биологии. издание ответы

Общая биология 1 bsc1010c Лабораторное руководство Ответы

Лабораторное руководство по биологии / лабораторные навыки

Сохранение изолятов дрожжей и плесени | Грибковые заболевания

О

Сохранение изолятов дрожжей и плесени обеспечивает долгосрочную жизнеспособность. В данной СОП описана процедура сохранения изолятов дрожжей и плесени для хранения.

Стандартная рабочая процедура

PDF-версия pdf icon[PDF – 137 КБ]

• 1. 0 Назначение
• 2.0 Область применения
• 3.0 Обязанности
• 4.0 Definitions
• 5.0 Equipment

• 6.0 Reagents/ Media
• 7.0 Reagent Preparation
• 8.0 Supplies, Other Materials
• 9.0 Safety Precautions
• 10.0 Procedure

1.0 Purpose

This document outlines the procedure for preserving изоляты дрожжей и плесени для хранения. Сохранение изолятов дрожжей и плесени обеспечивает долгосрочную жизнеспособность.

К началу страницы

2.0 Область применения

В этом документе описываются процедуры, которым необходимо следовать при сохранении изолятов дрожжей и плесени. Используемый метод консервации будет зависеть от морфологии и спорообразования отдельного изолята. Неспорообразующие плесени можно заморозить, но долгосрочная жизнеспособность изолята может значительно снизиться.

К началу страницы

3.0 Обязанности

3. 0 Обязанности

Позиция	Ответственность
Лаборанты	Пересев изолятов Подготовьте и поместите культуры на предметные стекла Проверка на спорообразование и чистоту Выполните процедуру
Начальник лаборатории	Обеспечивает надлежащее обучение персонала лаборатории замораживанию и транспортировке изолятов дрожжей и плесени

К началу страницы

4.0 Определения

Top of Page

5.

0 Equipment

5.1

Microscope

5.2

Biological Safety Cabinet

5.3

Incubator

5.4

-80°C Freezer

5.5

Холодильник

К началу страницы

6.0 Реагенты/Среда

6.1

80 % Glycerol-Sterile №5, каталог: 04430 (бывший аналог). Всегда используйте глицерин с пометкой «для использования в клеточных культурах» или «реагент для молекулярной биологии». Глицерин химической чистоты неприемлем.

6.2

Стерильный качество WFI -CLELL CULTURD CLARGE WATER

6.3

Sabouraud Dexstrose Agar (Emmons) : ( Ex: Scientific Product# L433184 и Equovel Product# L433184 и Equy Fisher.

6.4

Декстрозный агар Сабуро и хлорамфеникол/гентамицин: скошенных ( ex : Fisher Scientific Product #R0876 или аналогичный).

6,5

Овсяный агар/агар Паблума: (всегда используйте смешанный порошок злаков, а не чистую овсяную или рисовую муку). Его можно найти в отделе детского питания продуктового магазина.

6.6

Картофельно-декстрозный агар: ( ex : № 213200 по каталогу Becton Dickinson или аналогичный).

6,7

Tween-20: ( ex : Fisher Scientific Product # BP337-100 или аналогичный).

6,8

Lactophenol Cotton Blue: ( ex : Fisher Scientific Product # M1137410100 или аналогичный).

К началу страницы

7.0 Подготовка реагентов

7.1

500 мл раствора 20 % глицерина в стерильной воде – Подготовьтесь заранее, чтобы быть готовым к процедурам, описанным ниже.

7.1.1

Добавьте 375 мл стерильной воды качества WFI для клеточных культур в колбу на 1000 мл.

7.1.2

Добавьте 125 мл 80% глицерина в колбу на 1000 мл, содержащую воду.

7.1.3

Перемешивайте раствор, пока ингредиенты не будут тщательно перемешаны.

7.1.4

Профильтруйте раствор в стерильную фильтрующую установку Nalgene с размером пор 0,22.

7.1.5

Маркируйте бутылку как 20% Glycerol и укажите дату и имя/инициалы изготовителя и храните при 4°C.

7,2

Овсяный агар/агар Pablum:

7.2.1

Добавьте 25 г смеси сухих злаков (всегда используйте смесь злаков, а не чистую овсянку или рисовую муку. Их можно найти в отделе детского питания продуктового магазина). магазине) до 200 мл деионизированной воды.

7.2.2

Добавьте 5 г агара.

7.2.3

Доведите конечный объем до 250 мл.

7.2.4

Автоклавировать в течение 20 минут и разлить по чашкам Петри. Агар должен быть тонким, примерно 3-5 мм. Должно получиться 10-12 тарелок.

Top of Page

8.0 Supplies, Other Materials

8.1

10 µm Sterile inoculating loops

8.2

Cryogenic freezer boxes

8.3

15 ml blue top conical Falcon tubes

8.4

Серологические пипетки 10 мл

8.5

Предметные стекла

8.6

Покровные стекла любого размера34

Покровные стекла любого размера34

0119 8.7

1000 ml glass flask

8.8

4-Chamber petri dish

8.9

Lactophenol cotton blue or other stain

8.10

Sterile scalpels

8.11

Стерильные ватные тампоны

8.12

Упаковка стерильных игл (18G1)

8. 13

Фильтр 0,22 мкм 9 09003 101004

4 8.13

0004 Криогенный флакон 2 мл микроцентрифужных пробирок

Начало страницы

9.0 Меры предосторожности

ПРИМЕЧАНИЕ: При выполнении данной стандартной рабочей процедуры необходимо соблюдать все установленные меры безопасности.

9.1

Стандартные средства индивидуальной защиты должны соответствовать установленным правилам, но должны состоять как минимум из халатов, перчаток и защитных очков.

9.2

С образцами следует обращаться так, как если бы они были инфицированы, с использованием безопасных лабораторных процедур, описанных в 5-м издании «Биобезопасность в микробиологических и биомедицинских лабораториях» и в документе CLSI M29.-А.

9.3

Тщательно очистите и продезинфицируйте все рабочие поверхности свежеприготовленным раствором четвертичного дезинфицирующего очистителя Lysol Brand I. C, разбавленным 1:128 дистиллированной водой.

9.4

Тщательно вымойте руки после работы с образцами и тестовым реагентом.

9,5

Не объединяйте реагенты из разных партий или из разных бутылей одной партии.

9.6

Утилизируйте неиспользованные реагенты и отходы в соответствии с федеральными, государственными, местными и институциональными нормами.

К началу страницы

10.0 Процедура

10.1

Замораживание изолятов дрожжей

10.1. Замораживание изолятов дрожжей

Ступенька	Действие
1	Достаньте свежую чашку с агаром SCG или скошенную из холодильника при 4°C и поместите на стол. Всегда давайте тарелке или наклонной пластине нагреться до комнатной температуры.
2	Посейте штрихом чашку или скошенный SCG, взяв легкий инокулят из культуры дрожжей, подлежащей хранению, и инокулируйте свежую чашку.
3	Инкубируйте засеянный планшет в течение 48 часов при 30°C. Культура должна находиться в средней или поздней логарифмической фазе роста. При необходимости отрегулируйте время инкубации, пока не появятся колонии размером 2-3 мм.
4	Проверьте изолят под микроскопом, чтобы убедиться, что он свободен от бактериального загрязнения. Вы должны видеть дрожжевые клетки только при увеличении в 40 раз.
5	Следующие шаги должны выполняться в БББ для обеспечения стерильности.
6	Подготовьте криогенные флаконы с завинчивающимися крышками, пометьте дату и идентификационное название/номер изолята. По возможности используйте печатную этикетку. Напечатанные этикетки должны быть достаточно прочными, чтобы выдерживать температуру -80°C без разрушения. Почерк должен быть разборчивым, а чернила должны выдерживать температуру -80°C.
7	Добавьте в каждый флакон 1,5 мл стерильного 20% глицерина.
8	Сделайте густую суспензию дрожжевого роста с помощью стерильной инокуляционной петли или ватного тампона, эмульгировав дрожжевой рост в каждом флаконе. Закрепите крышку и вихрь в течение 5 сек.
9	Храните флаконы при температуре -70°C или в зависимости от условий вашей лаборатории.

10.2

Альтернативный метод: замораживание изолятов дрожжей

10.2 Альтернативный метод: замораживание изолятов дрожжей

Ступенька	Действие
1	Выполните шаги с 1 по 4 в методе заморозки 10.1.
2	Следующие шаги должны быть выполняли в BSC для обеспечения стерильности.
3	Подготовьте криогенные флаконы с завинчивающимися крышками, пометьте дату и идентификационное название/номер изолята. По возможности используйте печатную этикетку. Этикетки должны быть достаточно прочными, чтобы выдерживать температуру -80°C без разрушения. Почерк должен быть разборчивым, а чернила должны выдерживать температуру -80°C.
4	Соблюдая правила асептики, пипеткой перенесите 9 мл стерильного 20% раствора глицерина в стерильную градуированную коническую пробирку объемом 15 мл.
5	Сделайте тяжелую суспензию дрожжевого роста с помощью стерильной инокуляционной петли или ватного тампона, эмульгировав дрожжевой рост (приблизительно 5 колоний) в градуированную пробирку объемом 15 мл. Закрепите крышку и вихрь в течение 5 сек.
6	Используя стерильную пипетку для переноса, перенесите примерно 1,5 мл суспензии дрожжей в каждый криогенный флакон.
7	Храните флаконы при температуре -70°C или в зависимости от условий вашей лаборатории.

Примечание. Метод, описанный ниже в разделе 11.1, также можно использовать для изолятов дрожжей.

11.1

Замораживание плесневых изолятов с сильным спорообразованием

11.1 Замораживание плесневых изолятов с сильным спорообразованием

Ступенька	Действие
1	Достаньте свежую скошенную твердую среду (SA, PD и т. д.) из холодильника при 4°C, дайте нагреться до комнатной температуры и поместите в БББ. Примечание: Разные группы организмов лучше спорообразуют на разных типах сред (см. Таблицу A ниже)
2	Убедитесь, что 20% глицерина достаточно для количества изолятов, которые необходимо заморозить. Если нет, перейдите к шагу 7.1.
3	Поместите форму для консервации в БББ.
4	Инокулируйте свежий скошенный материал и поместите в инкубатор при 25°C. Примечание: Есть несколько плесеней, которым для производства спор требуется другая температура.
5	Инкубируйте скошенный в течение не менее 7 дней или до тех пор, пока под микроскопом не будут наблюдаться роскошные конидиальные образования. Медленно растущим организмам может потребоваться более длительная инкубация. Быстрорастущим организмам потребуется менее 7 дней.
6	Выполните пробную подготовку скошенного края, чтобы подтвердить образование спор. Убедитесь, что культура не загрязнена бактериями.
7	Примечание: Рассмотрите культуру под микроскопом и найдите образование спор/конидий. Если спорообразование не происходит, обратитесь к процедуре для селективной среды для спорообразования (раздел 11.3).
8	Подготовьте криогенные флаконы с завинчивающимися крышками, пометьте дату и идентификационное название/номер изолята. По возможности используйте печатную этикетку. Этикетки должны быть достаточно прочными, чтобы выдерживать температуру -80°C без разрушения. Почерк должен быть разборчивым, а чернила должны выдерживать температуру -80°C. Используя стерильную пипетку на 10 мл, добавьте 8 мл или меньше 20% глицерина в скошенный участок, содержащий форму, которую необходимо сохранить. Изоляты, которые не демонстрируют достаточного роста, потребуют меньшего количества пробирок и меньшего объема. Используя стерильную транспортировочную пипетку объемом 1 мл или петлю, сделайте густую суспензию путем эмульгирования спор плесени в 20% глицерине, слегка соскребая рост плесени пипеткой и многократно втягивая и выталкивая глицерин. С помощью транспортной пипетки добавьте ~1,5 мл суспензии в каждый из криопробирок и закройте крышки. Храните флаконы при температуре -70°C или в зависимости от условий вашей лаборатории.

11,2

Таблица А. Рецепты этих сред при необходимости можно найти в учебниках по грибкам.

11.2 Таблица А. Рецепты этих сред при необходимости можно найти в учебниках по грибкам.

Организм	Среда для спорообразования	Альтернативная среда для спорообразования
Дерматофиты	Паблум	Леониан
Aspergillus/Penicillium spp.	Чапек	Солод
Мукормицеты	КПК	Водопроводная вода
Черные формы	Паблум	В-8
Fusarium sp.	КПК	Картофель-морковь
Coccidioides sp.	ИПСС	Паблум

ПРИМЕЧАНИЕ. Скошенные культуры необходимо инкубировать при 25°C и периодически проверять (дважды в неделю) в течение 2 недель. Некоторым организмам потребуется более длительная инкубация или инкубация при 37°C в зависимости от вида.

11.3

Замораживание плесени Изоляты, плохо образующие споры (должны работать в БББ)

Ступенька	Действие
1	Достаньте свежую чашку с твердой средой (см. Таблицу A) из холодильника при 4°C. Дайте ему нагреться до комнатной температуры и поместите в БББ.
2	Убедитесь, что 20% глицерина достаточно для количества изолятов, которые необходимо заморозить. Если нет, перейдите к шагу 7.1.
3	Поместите форму для консервации в БББ.
4	Засейте свежую чашку и поместите в инкубатор при 25°C. Примечание: Есть несколько плесеней, которым для производства спор требуется другая температура.
5	Держите пластину не менее 7 дней. Медленно растущим организмам может потребоваться более длительная инкубация.
6	Примечание: Для очень медленно растущего изолята может потребоваться инокуляция нескольких чашек.
7	Выполните предварительную подготовку колонии к поиску спор. Убедитесь, что изолят не загрязнен бактериями.
8	Примечание: Производство спор может быть скудным; путем сбора больших участков грибкового нароста, которые могут содержать некоторые из немногих редких спор, можно использовать чашки со скудным образованием спор.
9	Подготовьте стерильные криогенные флаконы с завинчивающимися крышками, на которых должны быть указаны конкретный номер образца и дата. По возможности следует использовать печатную этикетку. Этикетки должны быть достаточно прочными, чтобы выдерживать температуру -80°C без разрушения. Почерк должен быть разборчивым и прочным, чтобы выдерживать -80°C. С помощью стерильной пипетки добавьте в каждый флакон 1,5 мл 20% глицерина. Стерильным скальпелем срежьте небольшие (3-4 мм) квадратные блоки грибкового мата с внешних (активно растущих) краев. Избегайте использования агаровой среды. Добавьте 5-6 блоков грибкового мата в каждый флакон и убедитесь, что они погружены в глицерин. Храните флаконы при температуре -70°C в зависимости от условий вашей лаборатории.

11.4

Консервация плесени в воде (должно быть выполнено в БББ)

11. 4 Консервация плесени в воде (должно быть выполнено в 901 БББ)

Ступенька	Действие
1	Выращивайте организмы в подходящей среде для спорообразования. (см. Таблицу А).
2	Проверка на спорообразование и чистоту в соответствии с вышеуказанными процедурами (11.3)
3	Подготовьте стерильные криогенные флаконы с завинчивающимися крышками и пометьте их, как указано выше, с указанием номера и даты конкретного образца (11.3, шаг 9a.) Заполните скошенную форму, предназначенную для хранения, 8 мл стерильной дистиллированной воды (вода должна быть предварительно стерилизована фильтрованием или автоклавированием) и одной каплей эмульгатора, такого как Tween-20. Используя стерильную транспортировочную пипетку объемом 1 мл или петлю, сделайте густую суспензию путем эмульгирования спор плесени в стерильной воде. Это достигается путем легкого соскабливания ростков плесени пипеткой и многократным втягиванием и выталкиванием стерильной дистиллированной воды. Добавьте ~1,5 мл суспензии в каждую криопробирку и закройте крышки. Поместите флаконы в соответствующую маркированную коробку и храните при комнатной температуре.

9

К началу страницы

ОТКАЗ ОТ ОТВЕТСТВЕННОСТИ:

Лаборатория Mycotic Diseases Branch разработала этот документ в качестве примера процедуры испытаний для сохранения изолятов дрожжей и плесени для хранения.